农杆菌介导的Bt cry1Ⅰa基因转化花椰菜的研究

doi:10.3969/j.issn.1008-0864.2011.01.03

›› 2011, Vol. 13 ›› Issue (1): 15-19.DOI: 10.3969/j.issn.1008-0864.2011.01.03

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农杆菌介导的Bt cry1Ⅰa基因转化花椰菜的研究

张永侠1,2,郎志宏1,朱莉1,杨丽梅3,张杰4,苍晶2,黄大昉1

(1.中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081|2.东北农业大学生命科学学院, 哈尔滨 150030|
3.中国农业科学院蔬菜花卉研究所, 北京 100081|4.中国农业科学院植物保护研究所, 北京 100193)

收稿日期:2010-10-13 修回日期:2010-12-09 出版日期:2011-02-15 发布日期:2011-02-15
通讯作者: 郎志宏,副研究员,主要从事植物抗虫、抗除草剂基因工程研究。E-mail:langzh@caas.net.cn
作者简介:张永侠,研究方向为植物基因工程。E-mail:zhang_yongxia@126.com
基金资助:
国家863计划项目(2008AA10Z155)资助。

Studies on Genetic Transformation Bt cry1Ⅰa Gene into Cauliflower by Agrobacterium-mediated Transformation

ZHANG Yong-xia1,2, LANG Zhi-hong1, ZHU Li1, YANG Li-mei3, ZHANG Jie4, CANG Jing2, HUANG Da-fang1

(1.Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081|2.College of Life Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin 150030|3.Institute of Vegetables and Flowers, CAAS, Beijing 100081|
4.Institute of Plant Protection, CAAS, Beijing 100193, China)

Received:2010-10-13 Revised:2010-12-09 Online:2011-02-15 Published:2011-02-15

摘要/Abstract

摘要：

利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)cry1Ⅰa基因构建了双TDNA边界的植物表达载体pCS1Ⅰa-LR，以瑞士雪球花椰菜具柄子叶和下胚轴为外植体，通过农杆菌介导法将cry1Ⅰa基因导入花椰菜中，共获得30株转化植株，经PCR检测，其中18株为PCR阳性植株，PCR阳性率为60%；RT-PCR和Western杂交检测结果表明，cry1Ⅰa基因在转基因花椰菜中可以正常转录和正确表达。转基因植株用小菜蛾幼虫进行饲虫试验，结果表明，转cry1Ⅰa基因花椰菜对小菜蛾具有很强的毒杀作用，昆虫幼虫的校正死亡率高达100%。获得的转基因花椰菜可用于下一步的抗虫花椰菜的培育。

关键词: 花椰菜;农杆菌介导转化;cry1Ⅰa基因;转基因植株

Abstract:

The double T-DNA border expression vector pCS1Ⅰa-LR harboring Bacillus thuringiensis cry1Ⅰa gene was introduced into the cotyledon petioles and hypocotyls of cauliflower（Brassica oleracea var. botrytis) mediated by Agrobacterium. Thirty regenerated plants were obtained, 18 of them were positive by PCR detection, which demonstrated that cry1Ⅰa gene was integrated into the cauliflower genome. The PCR positive rate is 60%. Moreover, RT-PCR and Western blot analysis showed that cry1Ⅰa gene were transcripted and translated, respectively in transgenic cauliflower. Bioassay results showed that the transgenic cauliflowers harboring cry1Ⅰa gene had the high toxicity to diamondback moth and the mortality of insect larvae was accounted for 100％. The transgenic cauliflower can be used for further insect resistant cauliflower breeding.

Key words: cauliflower, Agrobacteriummediated transformation, cry1Ⅰa gene, transgenic plants

中图分类号:

Q789

张永侠1,2,郎志宏1,朱莉1,杨丽梅3,张杰4,苍晶2,黄大昉1. 农杆菌介导的Bt cry1Ⅰa基因转化花椰菜的研究[J]. , 2011, 13(1): 15-19.

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农杆菌介导的Bt cry1Ⅰa基因转化花椰菜的研究

Studies on Genetic Transformation Bt cry1Ⅰa Gene into Cauliflower by Agrobacterium-mediated Transformation

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