来源于链霉菌Streptomyces fradiae var. k11的抗蛋白酶甘露聚糖酶的克隆

doi:10.3969/j.issn.1008-0864.2010.04.21

›› 2010, Vol. 12 ›› Issue (4): 114-120.DOI: 10.3969/j.issn.1008-0864.2010.04.21

来源于链霉菌Streptomyces fradiae var. k11的抗蛋白酶甘露聚糖酶的克隆

邱振华1,2,石鹏君2,刘素纯1,姚斌2

(1.湖南农业大学食品科技学院,湖南省食品科学与生物技术重点实验室, 长沙 410128|2.中国农业科学院饲料研究所, 农业部饲料生物技术重点开放实验室, 北京 100081)

收稿日期:2010-04-08 修回日期:2010-05-13 出版日期:2010-08-15 发布日期:2010-07-14
通讯作者: 刘素纯,研究员,博士,博士生导师,从事微生物工程研究。E-mail:liusc@163.com。姚斌,研究员,博士,博士生导师,从事饲料生物技术研究。Tel:010-82106053;E-mail:yaobin@caas-bio.net.cn
作者简介:邱振华,硕士研究生,主要从事微生物工程研究。E-mail:cdqiuzhenhua@163.com。
基金资助:
国家转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08003-020B);国家肉鸡产业技术体系(nycytx-42-G2-05)资助。

Cloning of a Protease-resistant β-mannanase Rooted in Streptomyces fradiae var. k11

QIU Zheng-hua1, SHI Peng-jun2, LIU Su Chun1, YAO Bin2

(1.Key Laboratory of Food Science and Biotechnology of Hunan Province, Institute of Food Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128|2.Key Laboratory of Feed Biotechnology, Ministry of Agriculture|Feed Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China)

Received:2010-04-08 Revised:2010-05-13 Online:2010-08-15 Published:2010-07-14

摘要/Abstract

摘要：

通过设计简并引物和TAIL-PCR的方法从Streptomyces fradiae var. k11中克隆得到一个β-l,4-甘露聚糖酶编码基因manS221,其全长1 359 bp,编码452个氨基酸,前端28个氨基酸为预测信号肽。构建表达载体pET-28a-manS221并转化大肠杆菌BL2l（DE3）,特异性表达manS221基因, 重组的甘露聚糖酶通过Ni-NTA亲和层析纯化。酶学性质分析表明,重组甘露聚糖酶最适温度为52℃,最适pH值为6.0,在pH 5.0~9.0的范围内有良好的稳定性,并且对中性蛋白酶具有高抗性。这些优良的性质使得ManS221在食品、饲料和纺织工业生产中具有良好的应用前景。

关键词: 链霉菌Streptomyces fradiae var. k11;甘露聚糖酶;manS221基因；蛋白酶抗性

Abstract:

The gene manS221 encoding a β-l, 4-mananase was cloned from Streptomyces fradiae var. k11 by degenerate primers and TAIL-PCR technology. manS221 gene contains 1 359 bp, encoding a 452 amino acid peptide consisting of a putative N-terminal signal peptide of 28 residues. The expression vector pET-28a-manS221 was constructed and transformed into Eschetichia coli BL21. The expressed ManS221 was purified by Ni-NTA chromatography. The optimum temperature and pH of the recombinant mannose were 52℃ and 6.0, respectively. The enzyme showed stability over a pH range of 5.0~9.0, and resistance to neutral protease. These favorable properties would make ManS221 as a good candidate in various industrial applications.

Key words: Streptomyces fradiae var. k11, mannose, manS221 gene, protease resistance

中图分类号:

Q786

邱振华1,2,石鹏君2,刘素纯1,姚斌2. 来源于链霉菌Streptomyces fradiae var. k11的抗蛋白酶甘露聚糖酶的克隆[J]. , 2010, 12(4): 114-120.

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来源于链霉菌Streptomyces fradiae var. k11的抗蛋白酶甘露聚糖酶的克隆

Cloning of a Protease-resistant β-mannanase Rooted in Streptomyces fradiae var. k11

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