甘蓝型油菜FAD2基因调控序列的克隆及瞬时表达分析

›› 2009, Vol. 11 ›› Issue (5): 96-101.

甘蓝型油菜FAD2基因调控序列的克隆及瞬时表达分析

王茂华,刘绵学,李德款,杨毅,李旭锋

(四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室, 成都 610064)

收稿日期:2009-04-24 修回日期:2009-07-02 出版日期:2009-10-15 发布日期:2009-10-15
通讯作者: 杨毅,教授,博士生导师,主要从事植物分子遗传及信号传导研究。Tel：028-85412281; E-mail：yangyi528@vip.sina.com
作者简介:王茂华,博士研究生,主要从事植物遗传与分子生物学研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(30671165)资助。

Cloning and Protoplast Transient Expression |of BnFAD2 Promoter in Brassica napus

WANG Mao-hua, LIU Mian-xue, LI De-kuan, YANG Yi, LI Xu-feng

(Key Laboratory of Bio-resources and Eco-environment, Ministry of Education, College of Life Science, |Sichuan University, Chengdu 610064, China)

Received:2009-04-24 Revised:2009-07-02 Online:2009-10-15 Published:2009-10-15

摘要/Abstract

摘要：

油酸去饱和酶FAD2（fatty acid desaturase 2）是广泛存在于植物中的一种能催化油酸脱氢生成亚油酸的还原酶。根据GenBank上已知的甘蓝型油菜FAD2基因设计引物,以甘蓝型油菜（Brassica napus L.）叶片总DNA为模板,进行TAIL-PCR扩增,获得约1.4 kb片段并测序。序列比对结果说明该片段为已知的FAD2基因编码区上游序列。将该片段进行不同长度的5′端缺失,并用缺失后的序列替换pBI221-LUC质粒上的CaMV35S启动子,构建了甘蓝型油菜瞬时表达载体,进行油菜原生质体瞬时表达的初步研究,结果表明该序列5′端-669 bp至-1019 bp对报告基因表达水平有较大的影响。结合启动子预测分析结果,此片段中可能存在的赤霉素应答元件、光调控元件等顺式作用元件对FAD2基因的表达调控具有重要作用。

关键词: 甘蓝型油菜；油酸去饱和酶基因FAD2；FAD2启动子；原生质体瞬时表达

Abstract:

Fatty acid desaturase 2 (FAD2), which is widely present in plants, can transform oleic acid to linoleic acid in plants. Designing primers based on GenBank BnFAD2 sequence, using Brassica napus leaf total DNA as template, we obtained 1.4 kb fragment by TAIL-PCR. Sequence analysis indicated that the fragment was upstream sequence of BnFAD2. Fragments with different 5′ end lack were inserted, substituting CaMV35S promoter, into pBI221-LUC. Analysis on Brassica napus protoplast transient expression suggested that the region between -669 bp and -1019 bp of FAD2 upstream sequence was important for FAD2 transcription. Considering the cis regulation elements prediction result of FAD2 upstream sequence, the putative gibberellin -response element, light-response elements and other cis regulation elements contained in FAD2 promoter are important in FAD2 gene expression and regulation.

Key words: Brassica napus, fatty acid desaturase 2, FAD2 promoter, protoplast transient expression

中图分类号:

王茂华,刘绵学,李德款,杨毅,李旭锋. 甘蓝型油菜FAD2基因调控序列的克隆及瞬时表达分析[J]. , 2009, 11(5): 96-101.

WANG Mao-hua, LIU Mian-xue, LI De-kuan, YANG Yi, LI Xu-feng. Cloning and Protoplast Transient Expression |of BnFAD2 Promoter in Brassica napus[J]. , 2009, 11(5): 96-101.

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