新疆伊犁昭苏健康鸡源大肠杆菌耐药性及耐药基因分析

doi:10.13304/j.nykjdb.2022.0268

摘要/Abstract

摘要：

为了解新疆伊犁昭苏地区鸡源大肠杆菌耐药性和耐药基因携带情况，并有针对性地指导用药，从伊犁昭苏克马克加尔村、森塔斯村、乌克勒加尔村3个村落采集300份鸡肛拭子样品，从中分离试验用大肠杆菌。利用琼脂稀释法测定其对6大类9种抗菌药物的耐药性，并利用PCR技术检测相应的耐药基因。结果表明，300份样品共分离大肠杆菌289株，森塔斯村、克马克加尔村和乌克勒加尔村的分离率分别为100.0%、97.0%和93.8%。药敏结果显示，289株大肠杆菌对氨苄西林、氟苯尼考、四环素的耐药率较高，分别为31.5%、26.0%、20.1%。不同村落之间耐药严重程度由高至低依次为森塔斯村、克马克加尔村、乌克勒加尔村，其中森塔斯村鸡源大肠杆菌对氨苄西林、头孢唑啉、氟苯尼考、恩诺沙星和硫酸粘菌素的耐药率分别为40.0%、35.0%、45.0%、40.0%和30.0%；乌克勒加尔村鸡源大肠杆菌对所有被检抗菌药物的耐药率均未超过20.0%。不同村落大肠杆菌耐药谱型丰富度不同，其中克马克加尔村鸡源大肠杆菌耐药谱型最多，有32种谱型，另2个村落的耐药谱型也超过10种。基因检测结果显示，3个村落共检出9种耐药基因，其中floR、tet（A）和bla_TEM基因的检出率分别为25.6%、18.0%和18.0%。克马克加尔村鸡源大肠杆菌中检出bla_TEM、bla_CTX-M、floR、oqxA、oqxB、tet（A）、tet（M）、ant（3''）-Ⅰa、mcr-1共9种耐药基因；乌克勒加尔村鸡源大肠杆菌中检出bla_TEM、bla_CTX-M、floR、oqxA、oqxB、tet（A）共6种耐药基因；而森塔斯村鸡源大肠杆菌只检出tet（A）、floR、bla_CTX-M和bla_TEM共4种耐药基因。综上，新疆伊犁昭苏鸡源大肠杆菌的耐药率较高，耐药谱型丰富，在加强对抗菌药物使用监管的同时，应结合药敏试验结果对养殖场采取不同的用药方案。

关键词: 鸡源, 大肠杆菌, 分离鉴定, 耐药性, 耐药基因

Abstract:

In order to understand the drug resistance phenotype and genotype carried of Escherichia coli in healthy chickens from three villages in Zhaosu area， Yili， Xinjiang， and guide drug pertinently， 300 chicken anal swab samples were collected from Kemarkgar village， Sentas village and Uklegar village in Zhaosu， Yili and Escherichia coli was isolated and identified. The agar dilution method was used in order to check the drug resistance （MIC） of 9 antibiotics in 6 categories， and PCR was applied to test the corresponding drug resistance genes. The results showed that 289 strains were isolated from the 3 villages， which the separation rates of Sentas village， Kemagar village and Uklegar village were 100.0%， 97.0% and 93.8%. 289 strains of Escherichia coli had high resistance rates to ampicillin， florfenicol and tetracycline， which were 31.5%， 26.0% and 20.1%， respectively. The severity of drug resistance from high to low was Sentas village， Kemakgar village， Uklegar village. The drug resistance rates of Escherichia coli from chicken in Sentas village to ampicillin， cefazolin， florfenicol， enrofloxacin and colistin sulfate were 40.0%， 35.0%， 45.0%， 40.0% and 30.0%， respectively. The drug resistance rate of Escherichia coli from chicken in Uklegar village was the lowest， no more than 20.0%. The richness of drug resistance spectrum of Escherichia coli in different villages was different. Among them， the drug resistance spectrum of Escherichia coli from chicken in Kemakgar village was the most abundant， up to 32 species. Also， the drug resistance spectrums of other 2 villages were more than 10. Gene test results showed that 9 drug resistance genes were detected， of which the detection rates of floR， tet（A） and bla_TEM genes were 25.6%， 18.0% and 18.0%， respectively. 9 kinds of drug resistance genes were detected in Escherichia coli from chicken in Kemakgar village， including bla_TEM， bla_CTX-M， floR， oqxA， oqxB， tet（A）， tet（M）， ant（3''）-Ⅰa， mcr-1； 6 kinds of drug resistance genes were detected in Escherichia coli from chicken in Uklegar Village， including bla_TEM， bla_CTX-M， floR， oqxA， oqxB， tet（A）； however， only tet（A）， floR， bla_CTX-M and bla_TEM were detected in Escherichia coli from chicken in Sentas village. To sum up， Escherichia coli from healthy chicken in Zhaosu， Yili， Xinjiang had the characteristics of high isolation rate， high drug resistance rate， rich drug resistance spectrum and low carrying rate of drug resistance genes. At the same time of strengthening the supervision of antibiotics， farms could adopt different drug regimens according to drug sensitivity test results.

Key words: chicken source, Escherichia coli, isolation and identification, drug resistance, drug resistance gene

中图分类号:

S831

李宏博, 陈月月, 杨玉洁, 徐琦琦, 秦蕾, 蔡鑫, 夏利宁. 新疆伊犁昭苏健康鸡源大肠杆菌耐药性及耐药基因分析[J]. 中国农业科技导报, 2023, 25(11): 123-131.

Hongbo LI, Yueyue CHEN, Yujie YANG, Qiqi XU, Lei QIN, Xin CAI, Lining XIA. Drug Resistance and Genotype Analysis of Escherichia coli in Healthy Chickens from Zhaosu， Yili， Xinjiang[J]. Journal of Agricultural Science and Technology, 2023, 25(11): 123-131.

图/表 7

参考文献 37

1	OH Y I, SEO K W, KIM D H, et al.. Prevalence, co-infection and seasonality of fecal enteropathogens from diarrheic cats in the Republic of Korea (2016-2019): a retrospective study [J/OL]. BMC Vet. Res., 2021, 17(1):367 [2022-03-10]. .
2	殷泽禄,万虎.大肠杆菌的研究综述[J].甘肃畜牧兽医,2019,49(5):33-35.
3	WOOLEY R E, GIBBS P S, BROWN T P, et al.. Chicken embryo lethality assay for determining the virulence of avian Escherichia coli isolates [J]. Avian Dis., 2000, 44(2):318-324.
4	李灶平.食品中大肠埃希氏、沙门氏菌耐药性与整合子的关系研究[D].成都:四川大学,2004.
	LI Z P. Incidence and characterization of integrons in Escherichia coli and Salmonella spp. strains isolated from food [D]. Chendu: Sichuan University, 2004.
5	刘建华.鸭源大肠杆菌主动外排基因及其调控基因的表达水平与多重耐药机制[D].郑州:河南农业大学,2011.
	LIU J H. The expression level of active efflux system related genes and mechanism of multidrug resistance in E . coli isolated from ducks [D]. Zhengzhou: Henan Agricultural University, 2011.
6	刘洋.多药耐药基因cfr在动物源肠球菌中的传播机制[D].北京:中国农业大学,2013.
	LIU Y. Transmission mechanism of multidrug resistance gene cfr in Enterococcus of animal origin [D]. Beijing: China Agricultural University, 2013.
7	Clincal and Laboratory Standards Institute. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing 2016:M100-S26 [S]. Clincal and Laboratory Standards Institute, 2016.
8	张青娴,徐引弟,王治方,等.猪源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的耐药性调查与耐药基因型分析[J].养猪,2019(4):105-108.
9	吴立婷.扬州地区宠物源大肠杆菌耐药性分析及耐药基因检测[D].扬州:扬州大学,2017.
	WU L T. Detection and analysis of drug resistance genes among Escherichia coli isolated from companion animals in Yangzhou area [D]. Yangzhou: Yangzhou University, 2017.
10	刘保光,栗俞程,汪保英,等.CTX-M型超广谱β-内酰胺酶研究进展[J].河南农业科学,2019,48(12):1-7.
	LIU B G, LI Y C, WANG B Y, et al.. Research progress of CTX-M Type extended-spectrum β‍-lactamases [J]. J. Henan Agric. Sci., 2019, 48(12):1-7.
11	周倩,张小燕,马尹鹏,等.蛋鸡投喂氟苯尼考后大肠杆菌耐药性变化及耐药基因检测[J].中国家禽,2020,42(9):40-46.
	ZHOU Q, ZHANG X Y, MA Y P, et al.. Changes of drug resistance and detection of florfenicol resistance genes in Escherichia coli isolated from laying hens after florfenicol administration [J]. China Poultry, 2020, 42(9):40-46.
12	南海辰.新疆不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌PMQR因子流行性调查[D].乌鲁木齐:新疆农业大学,2014.
	NAN H C. Epidemic investigation of PMQR factor among quinolone-resistance Escherichia coli from different animal sources in Xinjiang [D]. Urumqi: Xinjiang Agricultural University, 2014.
13	杜伟伟.河北省乳源金黄色葡萄球菌耐药性检测及耐药基因的研究[D].保定:河北农业大学,2015.
	DU W W. Research on drug resistence and resistant genes of the Staphylococcus aureus from raw milk in province of Hebei [D]. Baoding: Hebei Agricultural University, 2015.
14	BACCI C, BONI E, ALPIGIANI I, et al.. Phenotypic and genotypic features of antibiotic resistance in Salmonella enterica isolated from chicken meat and chicken and quail carcasses [J]. Int. J. Food Microbiol., 2012, 160(1):16-23.
15	孔海深,徐根云,李雪芬,等.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药基因检测[J].中华检验医学杂志,2005,28(10):57-59.
	KONG H S, XUE G Y, LI X F, et al.. The detection of clinically relevant antibiotic resistance genes in Staphylococcus aureus [J]. Chin. J. Lab. Med., 2005, 28(10):57-59.
16	黄琴.猪源大肠杆菌耐药表型和基因型研究[D].广州:华南理工大学, 2018.
	HUANG Q. Phenotypic and genotypic characterization in Escherichia coli isolates from swine [D]. Guangzhou: South China University of Technology, 2018.
17	宋方宇.生鲜肉中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性研究[D].泰安:山东农业大学,2018.
	SONG F Y. Isolation and identification of Stapltylococcus aureus from fresh meat and study on its antibiotic resistance [D]. Tai’an: Shandong Agricultural University, 2018.
18	高芸,轩慧勇,姚晓慧,等.MALDI-TOF质谱技术对猪肠道菌群中携带mcr-1细菌的鉴定与聚类分型[J/OL].中国动物传染病学报,2022:1-10[2022-01-14]. .
	GAO Y, XUAN H Y, YAO X H, et al.. Identification and typing of mcr-1-carrying bacteria strains isolated from pig gut flora by Maldi-T of mass spectrometry [J/OL]. Chin. J. Anim. Infect. Dis., 2022: 1-10 [2022-01-14]. .
19	PUVAČA N, DE L, FRUTOS R. Antimicrobial resistance in Escherichia coli strains isolated from humans and pet animals [J/OL]. Antibiotics (Basel), 2021, 10(1): 69. [2022-01-14]. .
20	唐标,郝运,林家辉,等.浙江省2市动物源大肠埃希菌及肠球菌耐药性比较和分析[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2021,47(5):647-659.
	TANG B, HAO Y, LIN J H, et al.. Comparison and analysis of antimicrobial resistance of Escherichia coli and Enterococcus isolated from animals in Jinhua City and Taizhou City of Zhejiang Province [J]. J. Zhejiang Univ. Agric. Life Sci., 2021, 47(5):647-659.
21	张海龙.河北省鸡源大肠杆菌的分离鉴定及毒力与耐药性检测[D].秦皇岛:河北科技师范学院,2021.
	ZHANG H L. Isolation and identification of Escherichia coli from chickens in Hebei Province and detection of virulence and drug resistance [D]. Qinghuangdao: Hebei Normal University of Science and Technology, 2021.
22	ALHABABI D A, ELTAI N O, NASRALLAH G K, et al.. Antimicrobial resistance of commensal Escherichia coli isolated from food animals in Qatar [J]. Microbiol. Drug Resist., 2020, 26(4):420-427.
23	徐小艳,王国相,印继华,等.1975~2002年大肠杆菌耐药性变化情况调查[J].畜牧与兽医.2003,35(3):16-17.
24	高玉斌,赵格,邹明,等.我国不同区域鸡源大肠杆菌的致病性与耐药性状分析[J].中国兽医杂志,2019,55(3):81-84, 89.
	GAO Y B, ZHAO G, ZOU M, et al.. Analysis of virulence gene carrying and drug resistance of Escherichia coli isolated from chickens in different regions of China [J]. Chin. J. Vet. Med. 2019, 55(3):81-84, 89.
25	林居纯,卓家珍,蒋红霞,等.不同地区猪源和禽源大肠杆菌耐药性监测[J].华南农业大学学报,2009,30(1):86-88, 93.
	LIN J C, ZHUO J Z, JIANG H X, et al.. Surveillance of antimicrobial resistance among Escherichia coli isolates from swine and poultry in different regions [J]. J. South China Agric. Univ., 2009, 30(1):86-88, 93.
26	陈伟.动物源大肠杆菌耐药基因与HPI毒力基因的检测及相关性分析[D].合肥:安徽农业大学,2013.
	CHEN W. Detection and correlation analysis of resistance and HPI virulence genes in Escherichia coli from animals. [D]. Hefei: Anhui Agricultural University, 2013.
27	陈月月,王凯,王舒丰,等.新疆伊犁地区不同动物源大肠杆菌耐药性调查[J].新疆农业科学,2018,55(8):1560-1568.
	CHEN Y Y, WANG K, WANG S F, et al.. Investigation into drug resistance of Escherichia coli from different animal sources in Yili, Xinjiang [J]. Xinjiang Agric. Sci., 2018, 55(8):1560-1568.
28	于桂阳,郑春芳,黄杰河.湖南永州市鸡大肠杆菌的耐药性调查与分析[J].家禽科学,2014(3):14-17.
29	郑生国.猪病防治过程中正确使用抗菌药物的方法探讨[J].畜禽业,2022,33(1):51-52.
30	王彬婷.鸡源大肠杆菌ESBL和PMQR基因流行分布及其传播特性研究[D].合肥:安徽农业大学,2014.
	WANG B T. Prevalence and characteristics of extended-spectrum β-lactamase and plasmid-mediated fluoroquinolone resistance genes in Escherichia coli isolated from chickens [D]. Hefei: Anhui Agricultural University, 2014.
31	贺志沛,王玲飞,刘建华,等.宠物犬源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的检测及药物敏感性分析[J].中国畜牧兽医,2013,40(6):211-215.
	HE Z P, WANG L F, LIU J H, et al.. Detection of floR gene in Escherichia coli isolated from pet dogs and investigation of antibiotic susceptibility [J]. Chin. Anim. Husb. Vet. Med., 2013, 40(6):211-215.
32	张雅为,高锋,刘耀川,等.阜新某鸡场大肠埃希菌四环素类药物敏感性试验及耐药基因检测[J].动物医学进展,2017,38(10):118-121.
	ZHANG Y W, GAO F, LIU Y C, et al.. Tetracycline sensitivity test and drug resistance gene detection of Escherichia coli in one chicken farm of Fuxin [J]. Pro. Vet. Med., 2017, 38(10):118-121.
33	王凤军.四环素类抗生素抗药性研究进展[J].现代畜牧科技,2021(12):11-13, 44.
	WANG F J. Research progress of betracycline antibiotic resistance [J]. Mod. Anim. Husb. Sci. Tech., 2021(12):11-13, 44.
34	邵微豪,韩雨婕,殷瑜,等.基于斑马鱼模型的4种氨基糖苷类药物的耳肾毒性比较[J].中国医药工业杂志,2021,52(7):934-939.
	SHAO W H, HAN Y J, YIN Y, et al.. Comparison of oto-and renal toxicities of four aminoglycosides in zebrafish [J]. Chin. J. Pharm., 2021, 52(7):934-939.
35	吕东月,汪照国,王鑫.耐药基因bla_NDM-1和mcr-1在肠道细菌中的研究进展[J].中国人兽共患病学报,2020,36(8):660-664.
	LYU D Y, WANG Z G, WANG X. Research progress of drug resistance of intestinal bacteria antibiotic resistance genes bla_NDM-1 and mcr-1 [J]. Chin. J. Zoonoses, 2020, 36(8):660-664.
36	TONG H, LIU J, YAO X, et al.. High carriage rate of mcr-1 and antimicrobial resistance profiles of mcr-1-positive Escherichia coli isolates in swine faecal samples collected from eighteen provinces in China [J]. Vet. Microbiol., 2018, 225:53-57.
37	NANG S C, LI J, VELKOV T. The rise and spread of mcr plasmid-mediated polymyxin resistance [J]. Crit. Rev. Microbiol., 2019, 45(2):131-161.

基因名称	引物序列	片段长度	退火温度	参考文献
Gene name	Primer sequence （5’-3’）	Fragment length/bp	Annealing temperature/℃	Reference
bla_TEM	F： CATTTCCGTGTCGCCCTTATTC	800	56	［8］
bla_TEM	R： CGTTCATCCATAGTTGCCTGAC	800	56	［8］
bla_CTX-M	F： TTTGCGATGTGCAGTACCAGTAA	544	56	［9］
bla_CTX-M	R： CGATATCGTTGGTGGTGGCCATA	544	56	［9］
bla_OXA	F： AAGAAACGCTACTCGCCTGC	564	56	［10］
bla_OXA	R： CCACTCAACCCATCCTACCC	564	56	［10］
floR	F： CACGTTGAGCCTCTATAT	868	55	［11］
floR	R： ATGCAGAAGTAGAACGCG	868	55
fexA	F： CTCTTCTGGACAGGCTGGAA	332	57
fexA	R： CCAGTTCCTGCTCCAAGGTA	332	57
fexB	F： ACTCGACACGCACGCTTAAT	320	57
fexB	R： CCTCCCCCAAGATACATTGC	320	57
pexA	F： CTTCCAGTTGAGAAGCGAGC	320	59
pexA	R： AGAAGCATACCCGTGAACATG	320	59
estDL136	F： ATGCCGTTAAACCCCCATGTCGAAG	933	55
estDL136	R： TCAAGCGACGTCTCTTTTAAGATT	933	55
qnrD	F： TTACGGGGAATAGAGTTA	468	55	［12］
qnrD	R： AATCAGCCAAAGACCAAT	468	55	［12］
qnrS	F： GCAAGTTCATTGAACAGGGT	619	55	［13］
qnrS	R： TCTAAACCGTCGAGTTCGGCG	619	55	［13］
oqxA	F： CTCGGCGCGATGATGCT	392	68	［12］
oqxA	R： CCACTCTTCACGGGAGACGA	392	68	［12］
oqxB	F： TTCTCCCCCGGCGGGAAGTAC	512	65	［12］
oqxB	R： CTCGGCCATTTTGGCGCGTA	512	65	［12］
tet（A）	F： GCGCCTTTCCTTTGGGTTCT	831	53	［13］
tet（A）	R： CCACCCGTTCCACGTTGTTA	831	53	［13］

基因名称	引物序列	片段长度	退火温度	参考文献
Gene name	Primer sequence （5’-3’）	Fragment length/bp	Annealing temperature/℃	Reference
bla_TEM	F： CATTTCCGTGTCGCCCTTATTC	800	56	［8］
bla_TEM	R： CGTTCATCCATAGTTGCCTGAC	800	56	［8］
bla_CTX-M	F： TTTGCGATGTGCAGTACCAGTAA	544	56	［9］
bla_CTX-M	R： CGATATCGTTGGTGGTGGCCATA	544	56	［9］
bla_OXA	F： AAGAAACGCTACTCGCCTGC	564	56	［10］
bla_OXA	R： CCACTCAACCCATCCTACCC	564	56	［10］
floR	F： CACGTTGAGCCTCTATAT	868	55	［11］
floR	R： ATGCAGAAGTAGAACGCG	868	55
fexA	F： CTCTTCTGGACAGGCTGGAA	332	57
fexA	R： CCAGTTCCTGCTCCAAGGTA	332	57
fexB	F： ACTCGACACGCACGCTTAAT	320	57
fexB	R： CCTCCCCCAAGATACATTGC	320	57
pexA	F： CTTCCAGTTGAGAAGCGAGC	320	59
pexA	R： AGAAGCATACCCGTGAACATG	320	59
estDL136	F： ATGCCGTTAAACCCCCATGTCGAAG	933	55
estDL136	R： TCAAGCGACGTCTCTTTTAAGATT	933	55
qnrD	F： TTACGGGGAATAGAGTTA	468	55	［12］
qnrD	R： AATCAGCCAAAGACCAAT	468	55	［12］
qnrS	F： GCAAGTTCATTGAACAGGGT	619	55	［13］
qnrS	R： TCTAAACCGTCGAGTTCGGCG	619	55	［13］
oqxA	F： CTCGGCGCGATGATGCT	392	68	［12］
oqxA	R： CCACTCTTCACGGGAGACGA	392	68	［12］
oqxB	F： TTCTCCCCCGGCGGGAAGTAC	512	65	［12］
oqxB	R： CTCGGCCATTTTGGCGCGTA	512	65	［12］
tet（A）	F： GCGCCTTTCCTTTGGGTTCT	831	53	［13］
tet（A）	R： CCACCCGTTCCACGTTGTTA	831	53	［13］

基因名称	引物序列	片段长度	退火温度	参考文献
Gene name	Primer sequences （5’-3’）	Fragment length/bp	Annealing temperature/℃	Reference
tet（B）	F： TTGGTTAGGGGCAAGTTTTG	659	55	［14］
tet（B）	R： GTAATGGGCCAATAACACCG	659	55	［14］
tet（M）	F： GTGTGACGAACTTTACCGAA	501	46	［15］
tet（M）	R： GCTTTGTATCTCCAAGAACAC	501	46	［15］
tet（K）	F： GTAGTGACAATAAACCTCCTA	360	55	［16］
tet（K）	R： CCAAGCATCGGCATCTCATA	360	55	［16］
acc（6'）/aph-（2''）	F： CCAAGAGCAATAAGGGCATA	220	55	［17］
acc（6'）/aph-（2''）	R： CACTATCATAACCACTACCG	220	55
aph（3'）-Ⅲ	F： GCCGATGTGGATTGCGAAAA	292	55
aph（3'）-Ⅲ	R： GCTTGATCCCCAGTAAGTCA	292	55
ant（3''）-Ⅰa	F： ATCTGGCTATCTTGCTGACA	284	54	［9］
ant（3''）-Ⅰa	R： TATGACGGGCTGATACTGG	284	54	［9］
aac6'-Ⅰb	F： ATGACCTTGCGATGCTCTAGA	486	54	［9］
aac6'-Ⅰb	R： CGAATGCCTGGCGTGTTT	486	54	［9］
ant（4'，4''）	F： GCAAGGACCGACAACATTTC	165	55	［15］
ant（4'，4''）	R： TGGCACAGATGGTCATAACC	165	55	［15］
mcr-1	F： CGGTCAGTCCGTTTGTTC	309	55	［18］
mcr-1	R： CTTGGTCGGTCTGTAGGG	309	55	［18］

基因名称	引物序列	片段长度	退火温度	参考文献
Gene name	Primer sequences （5’-3’）	Fragment length/bp	Annealing temperature/℃	Reference
tet（B）	F： TTGGTTAGGGGCAAGTTTTG	659	55	［14］
tet（B）	R： GTAATGGGCCAATAACACCG	659	55	［14］
tet（M）	F： GTGTGACGAACTTTACCGAA	501	46	［15］
tet（M）	R： GCTTTGTATCTCCAAGAACAC	501	46	［15］
tet（K）	F： GTAGTGACAATAAACCTCCTA	360	55	［16］
tet（K）	R： CCAAGCATCGGCATCTCATA	360	55	［16］
acc（6'）/aph-（2''）	F： CCAAGAGCAATAAGGGCATA	220	55	［17］
acc（6'）/aph-（2''）	R： CACTATCATAACCACTACCG	220	55
aph（3'）-Ⅲ	F： GCCGATGTGGATTGCGAAAA	292	55
aph（3'）-Ⅲ	R： GCTTGATCCCCAGTAAGTCA	292	55
ant（3''）-Ⅰa	F： ATCTGGCTATCTTGCTGACA	284	54	［9］
ant（3''）-Ⅰa	R： TATGACGGGCTGATACTGG	284	54	［9］
aac6'-Ⅰb	F： ATGACCTTGCGATGCTCTAGA	486	54	［9］
aac6'-Ⅰb	R： CGAATGCCTGGCGTGTTT	486	54	［9］
ant（4'，4''）	F： GCAAGGACCGACAACATTTC	165	55	［15］
ant（4'，4''）	R： TGGCACAGATGGTCATAACC	165	55	［15］
mcr-1	F： CGGTCAGTCCGTTTGTTC	309	55	［18］
mcr-1	R： CTTGGTCGGTCTGTAGGG	309	55	［18］

来源 Source	样品数 Number of samples	检出数 Number of isolates	分离率 Isolation rate/%
克马克加尔村Kemakgar village	200	194	97.0
森塔斯村 Sentas village	20	20	100.0
乌克勒加尔村 Uklegar village	80	75	93.8
总计 Total	300	289	96.3